组织处理12种方式

组织处理12种方式

1. 常规石蜡包埋处理

这是病理科最基础、最常用的一种方法。几乎所有送来的手术标本，比如切下来的阑尾、胃癌组织，最后都是走的这条路。它的核心目的是把软的组织变得又硬又脆，方便切成几微米厚的薄片。

具体流程像个流水线：
首先是“固定”。组织一离开身体，细胞就开始死亡分解，必须马上泡进福尔马林里，把它的形态“定格”在取下来的那一刻。 固定液的量要够，至少是组织体积的5到10倍，时间通常需要6到24小时。 一块1.5厘米 x 1.5厘米 x 0.3厘米的组织块是比较理想的大小。
然后是“脱水”。因为石蜡不溶于水，所以要用浓度从低到高的酒精（比如70%、80%、95%、100%）一步步把组织里的水换掉。 这一步如果没做好，组织就会发软，后面没法切。
接着是“透明”。酒精和石蜡也合不来，需要一个中间人，通常是二甲苯。二甲苯能溶于酒精也能溶于石蜡。 组织被二甲苯浸透后，会变得有点透明，所以叫这个名字。
最后是“浸蜡”和“包埋”。把组织放进融化的石蜡里，让蜡充分渗透进去，然后用蜡块把组织包起来，冷却凝固。 这样，一块适合切片的蜡块就做好了。

整个过程现在大多由全自动脱水机完成，设定好程序，机器会自动换液、加温，非常方便。

2. 冰冻切片处理

这种方法主打一个字：快。主要用在手术中，比如外科医生切下一个肿块，但不确定是良性还是恶性，就需要病理科医生在半小时内给出初步诊断，以决定接下来的手术范围。

它的原理很简单，就是利用低温把新鲜组织冻硬，然后直接切片。 不需要固定、脱水、透明这些复杂的步骤，所以特别快。
操作上，把新鲜组织放在一个金属托上，滴上一种叫OCT的包埋剂，然后迅速在零下20多度的恒冷箱里冷冻。 组织冻硬后，就可以用里面的切片机切片了。切出来的片子直接染色、看片子。
但是，冰冻切片的质量通常不如石蜡切片。因为快速冷冻会在细胞内外形成冰晶，对组织结构有破坏，图像会有点糙。 所以它一般只用于紧急的术中诊断，最终确诊还是要靠后面做的常规石蜡切片。

3. 骨组织脱钙处理

处理骨头或者有钙化点的组织时，必须多一个步骤：脱钙。因为钙质很硬，如果不去掉，切片刀的刀刃一下就废了，根本切不动。

脱钙就是在常规处理之前，用酸性液体把组织里的钙盐溶解掉。 常用的脱钙液有两大类：
一类是强无机酸，比如硝酸。 优点是速度快，但缺点也很明显，就是太“霸道”，容易破坏组织结构，影响后续的染色，尤其是免疫组化染色。
另一类是有机酸，比如甲酸和EDTA。甲酸比较温和，脱钙效果和对组织的损伤介于中间。 EDTA是最温和的，它通过螯合钙离子的方式脱钙，对组织结构和抗原的保护最好，但缺点是速度极慢，可能需要几周甚至几个月。
脱钙是否彻底很关键。可以用手捏一下，感觉组织从硬变软韧；或者用细针轻轻戳一下，如果能轻松穿过，就说明脱钙完成了。 脱钙完成后，要用水充分冲洗，把残留的酸洗掉，不然也会影响染色。

4. 细胞块处理

这个技术主要用来处理液体标本，比如胸水、腹水、尿液或者细针穿刺吸出来的东西。这些标本里的细胞是散的，没法直接做成蜡块。细胞块技术就是把这些分散的细胞收集起来，做成一个“人造组织”，然后按照常规石蜡流程处理。

做法通常是这样的：
先把液体标本离心，把细胞都沉淀到管子底下。
然后把上面的液体倒掉，用一些方法把沉淀下来的细胞凝聚成一个小团块。比如可以用琼脂糖凝胶把它包起来，冷却后就成了一个小果冻样的块。
之后，把这个含有细胞团的“果冻”放进包埋盒，像处理小块组织一样，进行脱水、透明、浸蜡和包埋。
这样做的好处是，可以把珍贵的细胞保存下来，不仅能观察形态，还能做免疫组化或者分子检测，对诊断帮助很大。

5. 微波组织处理

这是一种加速版的常规处理方法，利用微波的快速加热效应，缩短脱水、透明和浸蜡的时间。普通自动脱水机跑一个程序可能要十几个小时，而微波处理机能在两三个小时内完成。
微波能让液体分子快速震荡产热，使得酒精、二甲苯和石蜡能更快地渗透到组织内部。整个过程在严格的温度控制下进行，避免因为温度过高而把组织“煮熟”了。
这个方法对于需要快速出报告但又想保证切片质量的情况很有用，比如一些紧急的活检标本。它的效果比常规方法好得多，比冰冻切片质量高，是一种兼顾速度和质量的选择。

6. 透射电镜样本处理

如果想看细胞内部更微观的结构，比如线粒体、内质网，普通的光学显微镜就不够用了，需要用透射电子显微镜。但电镜的样本制备比石蜡切片要复杂得多，对组织损伤的要求也更苛刻。

关键点在于“小”和“快”。取的组织块必须非常小，通常小于1立方毫米，这样固定液才能快速渗透。 而且动作要快，组织离体后要立刻放进固定液里。
固定液也不同，除了用戊二醛做初固定，还要用锇酸做后固定，目的是更好地保存细胞膜和细胞器结构。
脱水后，不是用石蜡包埋，而是用环氧树脂这类更坚硬的材料包埋。 因为电镜切片要切到纳米级别（通常是50-70纳米厚），比石蜡切片薄几十倍，必须用更硬的包埋剂支撑。
整个过程对操作要求很高，每一步都要小心翼翼，避免造成人为的结构损伤。

7. 振动切片机处理

振动切片机主要用于处理新鲜的、未经固定的组织，特别是脑组织。 它的特点是在切片时，刀片会高频振动，像一把微型电锯，而不是像普通切片机那样直接推过去。
这种振动的方式可以减少对组织的挤压和撕扯，最大限度地保持细胞的活性和结构的完整性。 切下来的组织片通常比较厚，几十微米，可以直接用于电生理实验或者某些特殊的染色。
操作时，需要把组织块用胶水粘在一个样品座上，然后沉浸在冰冷的缓冲液里进行切片。 缓冲液的低温环境有助于减缓细胞的代谢，保持其活性。

8. 整体透明化处理

这是一项比较新的技术，也叫“组织透明术”。它可以让整个器官（比如整个小鼠大脑）或者大块的组织变得像玻璃一样透明。
它的原理是用特殊的化学试剂，把组织中造成光散射的主要成分——脂质给洗掉，同时调整组织的折射率，让它和周围的介质一致，这样光线就能直接穿过，而不会被散射。
透明化之后，再结合荧光标记技术，就可以用激光共聚焦显微镜直接对整个器官进行三维成像，观察内部精细的神经元网络或者血管分布，而不需要把它切成一张张的薄片。这对神经科学等领域的研究很有用。

9. 塑料包埋处理

除了用于电镜的树脂，有些特殊情况下，光镜样本也会用塑料（比如甲基丙烯酸甲酯）进行包埋。
这种方法主要用于需要观察硬组织和软组织连接界面的情况，比如带有人工关节的骨组织、牙齿和牙周组织等。因为塑料比石蜡硬得多，可以很好地支撑硬组织，在切片时不容易导致硬组织和软组织分离。
另外，对于需要切很薄的半薄切片（比如1微米厚）来获得更高分辨率的图像时，也会用到塑料包埋。它的处理流程和树脂包埋类似，但要求没有那么极端。

10. 免疫组化样本的特殊处理

虽然免疫组化（IHC）是染色步骤，但它对前期的组织处理有特殊要求。IHC的目标是检测组织中的特定蛋白质（抗原）。
在固定阶段，福尔马林虽然能很好地保存形态，但它会在蛋白质之间形成交联，像一张网把抗原给“罩住”了，可能会导致抗体无法识别。因此，在染色前，通常需要一个“抗原修复”步骤，比如用高温高压或者特定的酶（如胰蛋白酶）处理切片，把这个“罩子”打开。
所以，从组织处理的一开始就要考虑到后续要做什么检测。如果固定时间太长，抗原被过度交联，可能就怎么修复都“救”不回来了。

11. 替代试剂的处理流程

传统的组织处理流程中使用二甲苯作为透明剂，但二甲苯有毒性，对操作人员健康和环境都不友好。因此，现在有很多实验室开始使用更环保、更安全的替代品。
市面上有很多种二甲苯替代品，大多是基于柠檬烯或者烷烃类的溶剂。它们的作用和二甲苯一样，都是作为酒精和石蜡之间的桥梁。
更换成替代试剂后，脱水机里的程序参数，比如处理时间、温度，可能需要根据具体试剂的特性进行调整和优化，以达到最好的处理效果。这是一个趋势，让病理实验室变得更安全。

12. 全自动封闭式脱水机处理

这是对常规处理方式的设备升级。老式的自动脱水机是开放式的，组织篮在一个个试剂缸之间移动，试剂的味道会散发到空气中。
而全自动封闭式脱水机，组织篮是固定不动的，试剂通过管道自动注入和排出处理仓。 整个过程在一个密闭的系统里完成，排出的废气也会经过活性炭过滤，大大减少了有害气体的暴露。
这类设备通常更智能，可以设置更复杂的程序，比如压力和真空交替，加速试剂渗透。 有些高端型号甚至可以同时运行两个不同的程序，处理不同类型的组织，提高了工作效率。